Klíčový rozdíl - Nitrocelulóza vs. Nylonová membrána
Blotování je důležitá technika pro detekci specifických sekvencí DNA, RNA a proteinů z jejich směsí v molekulární biologii. Dělá se to pomocí membrány zvané blot. Existují různé techniky blotování, jako je severní, jižní a západní blotování. Výběr vhodné membrány pro blotovací proces by měl být proveden pečlivě, aby se zabránilo nespecifické vazbě a nesprávným detekcím. Nitrocelulóza, nylon a PVDF jsou běžně používané membrány v blotovacích technikách. Mají různé vlastnosti. Klíčovým rozdílem mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou je to, že nitrocelulózové membrány mají vysoký imobilizační potenciál proteinu, zatímco nylonové membrány mají vysoký imobilizační potenciál nukleové kyseliny. V blotovacích technikách se však často používají oba typy membrán.
OBSAH
1. Přehled a hlavní rozdíl
2. Co je to nitrocelulózová membrána
3. Co je to nylonová membrána
4. Porovnání vedle sebe - nitrocelulóza vs. nylonová membrána
5. Shrnutí
Co je to nitrocelulózová membrána?
Nitrocelulózová membrána je běžně používaný membránový filtr v technikách blotování nukleových kyselin a proteinů. Má vysoký potenciál vazby na bílkoviny. Nitrocelulózové membrány jsou proto široce používány v technice westernového blotování. Nitrocelulózové membrány jsou kompatibilní se všemi hybridizačními technikami a vykazují vynikající vazebné kapacity bez interferencí. Nitrocelulózové membrány mají přirozeně hydrofilní povahu. Dělají hydrofilní interakci s molekulami a účinně je imobilizují na membránu. Komerční nitrocelulózové membrány jsou k dispozici ve dvou velikostech pórů: 0,45 a 0,2 um.
Obrázek 01: Nitrocelulózová membrána používaná při Western blotu
Co je to nylonová membrána?
Nylonová membrána je dalším typem komerční membrány používané v blotovacích technikách. Alternativně se používá s nitrocelulózovými membránami pro jižní a severní blotování. Nylonové membrány jsou ideální pro Southern blot než nitrocelulóza kvůli jejich vysoké afinitě k vazbě s DNA. Vzhledem k několika jedinečným vlastnostem nylonových membrán vědci běžně používají nylonové membrány pro jižní a severní blotování místo přes nitrocelulózovou membránu. Nylonové membrány se na rozdíl od nitrocelulózy také doporučují ke stripování a opětovnému testování.
Obrázek 02: Nylonová membrána použitá pro Southern blot
Jaký je rozdíl mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Nitrocelulóza vs Nylonová membrána |
|
| Nitrocelulózové membrány jsou křehké. | Nylonové membrány jsou méně křehké. |
| Zacházení | |
| Je obtížné je zvládnout. | Snadno se s nimi manipuluje. |
| Opakování | |
| Nepodporované nitrocelulózové membrány je těžké vytknout. | Opakované testování je snadné s nylonovými membránami. |
| Kompatibilita s různými podmínkami skladování | |
| Nitrocelulózové membrány mají menší pevnost, aby vydržely různé podmínky skladování. | Nylonové membrány robustněji reagují na různé podmínky skladování. |
| Použití | |
| Je nutné předem namočit. | U nylonových membrán není nutné předem smáčení. |
| Hydrofilní povaha | |
| Nitrocelulózové membrány jsou hydrofilní povahy, ale jsou méně hydrofilní než nylonové membrány. | Jsou vysoce hydrofilní povahy. |
| Potenciál imobilizace | |
| Nitrocelulózové membrány mají nižší afinitu k nukleovým kyselinám. Ale má vysokou afinitu k proteinům. | Nylonové membrány mají vysoký vazebný potenciál s nukleovými kyselinami než nitrocelulózové membrány. |
Shrnutí - Nitrocelulóza vs Nylonová membrána
Nitrocelulózové a nylonové membrány jsou speciální fólie používané v blotovací technice k reprodukci páskovacího vzoru na gelu. Umožňují možnost detekce specifické sekvence nebo proteinu ze směsí jejich imobilizací na membráně. Jakmile jsou molekuly imobilizovány na membráně, mohou být použity jako substrát pro hybridizační analýzu se značenými sondami. Nitrocelulózová membrána se běžně používá k detekci proteinů v technice westernového blotu díky své vysoké vazebné afinitě k proteinům. Nylonové membrány se často používají pro jižní a severní blotování. To je rozdíl mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou.
