Klíčový rozdíl - přechodná vs. stabilní transfekce
Transfekce je proces, který se podílí na genovém přenosu eukaryotických buněk pomocí chemických nebo fyzikálních metod. Transfekci lze rozdělit do dvou hlavních typů: přechodná transfekce a stabilní transfekce. Během přechodné transfekce se požadovaný gen neintegruje s hostitelským genomem a je krátkodobě dočasně exprimován v hostiteli, zatímco při stabilní transfekci se požadovaný gen integruje s hostitelským genomem a je dlouhodobě udržován po několik generací.. To je klíčový rozdíl mezi přechodnou a stabilní transfekcí. V obou případech je transfekce úspěšná a jsou exprimovány geny.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je přechodná transfekce
3. Co je stabilní transfekce
4. Porovnání vedle sebe - přechodná vs. stabilní transfekce
5. Shrnutí
Co je přechodná transfekce?
Transfekce je důležitým nástrojem pro inzerci genů do eukaryotických buněk. Mezi dvěma typy transfekce je přechodná transfekce běžným způsobem přenosu genů. Prostřednictvím vektoru se cizí geny transformují uvnitř hostitelských buněk. Jakmile cizí DNA vstoupí do hostitelské buňky, má dvě možnosti. Může se buď integrovat do hostitelského genomu a replikovat se, nebo zůstat uvnitř bez integrace do genomu. Přechodná transfekce vykazuje dočasnou expresi vložených genů bez integrace do hostitelského genomu. Geny exprimují a produkují kódovaný protein, dokud se buňka nerozdělí. Kvůli neschopnosti integrace se však nemůže replikovat a vstoupit do budoucích generací. Tento typ transfekce je na krátkou dobu úspěšný. Během buněčného dělení nebo v důsledku některých dalších faktorů je cizí DNA vystavena degradaci. Přechodná transfekce se projeví, když je cizí DNA ve formě vysoce stočené DNA.
Obrázek 01: Přechodná transfekce
Co je stabilní transfekce?
Stabilní transfekce ukazuje úspěšnou integraci cizích genů do hostitelského genomu. Jakmile cizí DNA vstoupí do hostitelské buňky, část cizí DNA se integruje s hostitelským genomem a stane se jeho součástí. Cizí DNA tedy také replikuje a přechází do budoucích generací, když se replikuje genom hostitele. Tento typ transfekce je složitý a vzácný. Avšak díky stabilní transfekci do genomu je tato vlastnost udržována po delší dobu několika generací.
Stabilní transfekce je obtížný proces a vyžaduje efektivní dodávání DNA a buněčné získávání cizí DNA do jejího genomu. Proto lineární DNA upřednostňuje stabilní transfekci než kruhová DNA. Nicméně trvalá transfekce rychlost je přibližně jednou za 10 4 transformovaných buňkách. Stabilní transfekce může být pozorována kotransfomací selekčního markeru a provedením umělé selekce na médiu.
Obrázek 02: Stabilní transfekce
Jaký je rozdíl mezi přechodnou a stabilní transfekcí?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Přechodná vs stabilní transfekce |
|
| Cizí DNA se neintegruje do hostitelského genomu. | Cizí DNA se integruje s hostitelským genomem a stává se jeho součástí. |
| Replikace v hostiteli | |
| Přechodně transfektované geny se v hostiteli nereplikují. Geny proto nejsou předávány dalším generacím. | Geny jsou replikovány v hostiteli a předávány budoucím generacím. |
| Doba trvání genového výrazu | |
| Geny jsou vyjádřeny na konečnou dobu a poté jsou zničeny. | Geny se stávají součástí genomu a jsou v generaci exprimovány po dlouhou dobu. |
| Použití | |
| To je užitečné pro studium účinků krátkodobé exprese genů nebo genových produktů. | To je užitečné pro dlouhodobé studium účinků genových expresí. |
| Detekce transfekce | |
| Geny jsou exprimovány a lze je snadno detekovat vložením reportérového genu. | Stabilní transfekci lze snadno detekovat vložením volitelného markeru a výběrem pomocí umělého výběru na médiu. |
| Výskyt a proces | |
| Přechodná transfekce je běžná a není složitá. | Stabilní transfekce je vzácná a její provedení je složité. |
| Povaha DNA | |
| Vysoce nadšroubovicová DNA je vhodná pro přechodnou transfekci. | Lineární DNA jsou vhodné pro stabilní transfekci. |
| Aplikace | |
| Používá se ke studiu genového knockdownu nebo umlčování pomocí inhibičních RNA, produkce proteinu v malém měřítku | To se používá k produkci bílkovin ve velkém měřítku, dlouhodobější farmakologické studie, genová terapie, výzkum mechanismů dlouhodobé genetické regulace |
Shrnutí - Přechodná vs. stabilní transfekce
Přechodné a stabilní transfekce jsou dva typy transfekcí, které se projevují během přenosu genu do eukaryotických buněk nevirovými systémy. Transformovaná cizí DNA není integrována s hostitelským genomem při přechodné transfekci, zatímco se integruje s hostitelským genomem při stabilní transfekci. Kruhová stočená DNA je ukázána jako přechodná transfekce, zatímco lineární DNA upřednostňuje stabilní transfekci. To je rozdíl mezi přechodnou a stabilní transfekcí. Přechodná transfekce je však častější a snadnější ve srovnání se stabilní transfekcí. Ale výběr jednoho ze dvou závisí na účelu genového přenosu a délce výzkumného projektu.
