Klíčový rozdíl - HPLC vs. HPTLC
Klíčový rozdíl mezi HPLC a HPTLC spočívá v tom, že HPLC umožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku, zatímco HPTLC neumožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku.
Chromatografie je metoda fyzické separace, která se používá k oddělení a identifikaci složek ve směsi. Jak HPLC, tak HPTLC jsou chromatografické techniky. HPLC je vysoce účinná kapalinová chromatografie. HPTLC je vysoce účinná tenkovrstvá chromatografie.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je HPLC
3. Co je HPTLC
4. Porovnání vedle sebe - HPLC vs. HPTLC ve formě tabulky
5. Shrnutí
Co je to HPLC?
HPLC je vysoce účinná kapalinová chromatografie. Jedná se o analytickou techniku používanou k oddělení, identifikaci a kvantifikaci složek ve směsi. Při této technice se vzorek rozpustí ve vhodném rozpouštědle. Poté se rozpouštědlo se vzorkem nechá projít čerpadlem o daném tlaku. Čerpadlo je naplněno pevným adsorpčním materiálem. Poté se některé složky silně váží na absorpční materiál, zatímco jiné složky se váží volně. To způsobí, že komponenty budou mít různé průtoky čerpadlem. Proto lze komponenty snadno oddělit.
Obrázek 01: Systém HPLC
Adsorpční materiál, který plní čerpadlo, se nazývá stacionární fáze. Rozpouštědlo s rozpuštěným vzorkem je známé jako mobilní fáze. Čerpadlo použité v této technice se nazývá kolona. Kolona je naplněna adsorpčním materiálem, nejčastěji částicemi oxidu křemičitého. Velikost těchto částic se může pohybovat od 2 do 50 μm. Proces separace je ovlivněn složením mobilní fáze a teplotou systému. Interakce mezi stacionární fází a složkou ve vzorku mohou být hydrofobní interakce, interakce dipól-dipól, iontová vazba atd.
Pracovní tlak HPLC je podstatně vyšší než u tradiční kapalinové chromatografie. Leží kolem 50 - 350 barů. Rozdíl mezi kapalinovou chromatografií a HPLC spočívá v tom, že při kapalinové chromatografii vzorek propadá kolonou působením gravitace, zatímco při HPLC je vzorek tlakem přes kolonu. Velikost kolony a absorpčních částic jsou také velmi malé ve srovnání s tradiční kapalinovou chromatografií. Rozlišení dané technikou HPLC je však lepší.
Co je to HPTLC?
HPTLC je vysoce účinná tenkovrstvá chromatografie. Jedná se o pokročilou a automatizovanou formu tradičního TLC. Tato technika poskytuje efektivní rozlišení v krátkém časovém období. V této analytické metodě lze vzorek a referenci analyzovat současně, což umožňuje srovnání vzorku s referencí. Poskytuje lepší analytickou přesnost než jiné chromatografické techniky. Čas potřebný pro analýzu je kratší. Tato technika je nízkonákladová.
Obrázek 02: Analýza potravinářských barviv pomocí HPTLC
Metoda HPTLC je jednoduchý proces a je také vyloučen krok přípravy vzorku (v tradiční TLC je krok přípravy vzorku zahrnut před separací. Tento krok zahrnuje čištění a obohacení). Rozpouštědlo lze použít přímo bez jakékoli předběžné úpravy, i když jiné chromatografické techniky vyžadují předběžnou úpravu, jako je odplynění, filtrace atd.
Adsorpčním materiálem používaným v HPTLC je oxid křemičitý s velmi malými velikostmi částic. V tradiční TLC je velikost částic oxidu křemičitého 5-20 μm, zatímco v HPTLC je to 4-8 μm. Vzorek se nanáší na HPTLC desku pomocí aplikátoru. Poskytuje jednotné a bezpečné použití. Poté se destičky umístí do komory s mobilní fází. Komora by měla být nasycena parou mobilní fáze. Po procesu HPTLC lze detekovat skvrny, které se přesunuly. Při detekci skvrn na destičce používá technika HPTLC vhodnou UV oblast nebo jódovou komoru.
Jaký je rozdíl mezi HPLC a HPTLC?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC je vysoce účinná kapalinová chromatografie. | HPTLC je vysoce účinná tenkovrstvá chromatografie. |
| Technika | |
| Při HPLC se mobilní fáze s rozpouštědlem nechá projít kolonou naplněnou stacionární fází. | V HPTLC je vzorek nanesen na TLC desku a je umístěn uvnitř komory obsahující mobilní fázi; poté se vzorek nechá migrovat nahoru po desce spolu s mobilní fází. |
| Měření | |
| Při HPLC se k oddělení složek ve vzorku používají rozdíly mezi průtoky složek kolonou. | V HPTLC se rozdíly mezi vzdálenostmi uraženými každou komponentou ve vzorku používají k oddělení komponent ve vzorku. |
| Kvantitativní separace | |
| HPLC umožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku. | HPTLC neumožňuje kvantitativní oddělení složek ve vzorku. |
Shrnutí - HPLC vs HPTLC
HPLC a HPTLC jsou dvě chromatografické techniky. Klíčový rozdíl mezi HPLC a HPTLC spočívá v tom, že HPLC umožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku, zatímco HPTLC neumožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku.
