Klíčový rozdíl - Gram Stain vs. Acid Fast
Bakterie jsou velmi malé mikroorganismy. Jsou transparentní a jejich detekce je obtížná za životních a nepoškozených podmínek. Proto jsou vyvinuty různé metody barvení, které usnadňují detekci bakterií. Existují tři hlavní typy barvicích technik: jednoduché barvení, diferenciální barvení a strukturní barvení. Diferenciální barvení je technika, která k rozlišení bakterií používá více než jedno barvení. Gramové barvení a kyselinovzdorné barvení jsou obecně známé jako diferenciální barvení. Gramovo barvení je technika diferenciálního barvení, která rozděluje bakterie do dvou skupin známých jako grampozitivní bakterie a gramnegativní bakterie. Kyselinově rychlé barvení je diferenciální barvivo používané k identifikaci kyselinovzdorných organismů, jako je Mycobacterium, z nekyselých rychlých organismů. Toto je klíčový rozdíl mezi barvením Gram a barvením Acid Fast.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je Gram Stain
3. Co je Acid Fast
4. Podobnosti mezi Gram Stain a Acid Fast
5. Porovnání vedle sebe - Gram Stain vs. Acid Fast ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je Gram Stain?
Gramovo barvení je důležitá technika diferenciálního barvení používaná pro bakteriální identifikaci v mikrobiologii. Tuto techniku zavedl dánský bakteriolog Hans Christian Gram v roce 1884. Gramovo barvení kategorizuje bakterie do dvou hlavních skupin pojmenovaných gram pozitivní a gram negativní, které jsou velmi důležité při klasifikaci a identifikaci bakterií. Mikrobiologové provádějí barvení gramů jako počáteční krok v charakterizaci bakterií během svých studií.
Bakterie jsou seskupeny podle rozdílů v jejich buněčné stěně. Grampozitivní bakterie se skládají z tlusté peptidoglykanové vrstvy v jejich buněčné stěně, zatímco gramnegativní bakterie se skládají z tenké peptidoglykanové vrstvy v jejich buněčné stěně. Výsledek gramového barvení bude založen na rozdílu v tloušťce peptidoglykanové vrstvy buněčné stěny.
Gramovo barvení se provádí za použití čtyř různých činidel, jmenovitě; primární skvrna, mořidlo, odbarvovací prostředek a protizápachová skvrna. Krystalová violeť a safranin se používají jako primární a proti skvrny, zatímco gramy jódu a 95% alkoholu se používají jako mořidlo a odbarvovač. Základní kroky barvení gramů jsou následující;
- Bakteriální nátěr se připraví na čistém sklíčku, zafixuje se a ochladí.
- Roztěr je zaplaven krystalickou fialovou po dobu 1 - 2 minut.
- Stěr se opláchne pomalu tekoucí vodou z vodovodu, aby se odstranily přebytečné skvrny.
- Gramy jódu se nanáší na nátěr po dobu 1 minuty.
- Nátěr se opláchne pomalu tekoucí vodou z vodovodu
- Roztěr se promyje 95% alkoholem po dobu 2 - 5 sekund a opláchne se pomalu tekoucí vodou z vodovodu.
- Roztěr se 1 minutu obarví safraninem
- Roztěr se opláchne pomalu tekoucí vodou z vodovodu, vysuší se a pozoruje se pod mikroskopem.
Na konci gramového barvení budou gramnegativní bakterie pozorovány v růžové barvě, zatímco grampozitivní bakterie budou pozorovány ve fialové barvě.
Obrázek 01: Gram negativní a gram pozitivní bakterie
O výsledku barvení v gramech rozhoduje tloušťka vrstvy peptidoglykanu v jejich buněčné stěně. Během kroku odbarvení se primární barvivo a mořidlo snadno odstraní z gramnegativních bakterií a stanou se bezbarvé, protože mají tenkou vrstvu peptidoglykanu. Primární barvivo je zadrženo v grampozitivních bakteriích, protože mají silnou vrstvu peptidoglykanu. Počáteční barvení nebude účinné pro grampozitivní bakterie kvůli retenci primárního barvení. Gramově pozitivní bakterie budou tedy viditelné v primární barvě skvrn, tj. Fialové barvě. Počáteční skvrna obarví gramnegativní bakterie a budou viditelné v pick color, což je safraninová barva. Proto je snadné rozdělit bakterie do dvou skupin podle gramového barvení a je cenné při diferenciaci a identifikaci bakterií.
Co je Acid Fast?
Stálost v kyselinách je fyzikální vlastnost určitých bakterií, zejména jejich odolnost vůči odbarvování kyselinami během barvení. Jakmile jsou tyto organismy obarveny, odolávají postupům odbarvování na bázi zředěných kyselin nebo etanolu, které jsou běžné v mnoha protokolech o barvení. Těmto organizmům je tedy dán název „rychle kyselý“. Tato vlastnost se projevuje díky vysoké hladině voskovitého materiálu (mykolových kyselin) v buněčných stěnách. Tento test je rozhodující pro identifikaci Mycobacterium tuberculosis.
Obrázek 2: Rychle kyselé mykobakterie
Toto kyselé rychlé barvení vyvinul Paul Ehrlich v roce 1882. Ehrlichova kyselá rychlá technika byla upravena Ziehl-Neelsenem a nyní se používá častěji. Postup rychlého barvení kyselinou zahrnuje tři různá činidla. Jako primární skvrna se používá Carbol fuschin. Jako odbarvovací činidlo se používá kyselý alkohol. Jako protibarvící se používá methylenová modř. Postup barvení se provádí následujícím způsobem.
- Primární skvrna (carbol fuchsin) se nanese na fixovaný vzorek na podložním sklíčku (všechny buňky budou obarveny červeně).
- Sklíčko je zahříváno v páře po dobu 5 minut, čímž se skvrny řádně vnesou do buněk.
- Poté se přidá odbarvovací roztok (Tím se odstraní červené barvivo ze všech buněk s výjimkou kyselinovzdorných bakterií).
- Přidá se methylenová modř jako protikus (vybarví všechny odbarvené bakteriální buňky).
- Kyselé rychlé bakterie zůstávají červené, zatímco nekyselé rychlé bakterie se zbarví modře.
Jaké jsou podobnosti mezi Gram Stain a Acid Fast?
- Gramovo barvení a Acid fast jsou dvě různé techniky barvení.
- Obě techniky kategorizují bakterie do dvou skupin.
- Obě techniky používají dvě skvrny a jednu odbarvovací.
Jaký je rozdíl mezi Gram Stain a Acid Fast?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gramovo barvení je technika diferenciálního barvení, která rozděluje bakterie na dvě skupiny, grampozitivní bakterie a gramnegativní bakterie. | Kyselé rychlé barvení je rozdílné barvení používané k identifikaci kyselinovzdorných organismů od nekyselých rychlých organismů. |
| Primární skvrna | |
| Krystalová fialová je běžně používané primární barvení při barvení gramů. | Carbol fuchsin je primární barvivo používané v kyselině rychle. |
| Odbarvovací prostředek | |
| 95% alkoholu se používá jako odbarvovací činidlo při barvení gramů. | Kyselý alkohol se používá jako odbarvovací činidlo v kyselém půstu. |
| Counter Stain | |
| Gramovo barvení používá safranin jako protizánětlivé barvivo. | Kyselé rychlé barvení používá methylenovou modř jako protizáruku. |
| Pozorování | |
| Gram negativní bakterie jsou pozorovány v barvě a gram pozitivní bakterie jsou pozorovány ve fialové barvě. | Kyselé rychlé bakterie jsou pozorovány v červené barvě a nekyselé rychlé bakterie jsou pozorovány v modré barvě. |
Shrnutí - Gram Stain vs. Acid Fast
Vizualizace mikroorganismů v živém stavu je obtížná. Proto se biologické barvení a barvicí postupy ve velké míře používají ke studiu jejich vlastností. Diferenciální barvení je jeden typ barvicí techniky používané k rozlišení bakterií. Gramové barvení a kyselé rychlé barvení jsou dvě různé techniky barvení. Gramovo barvení rozlišuje gramnegativní bakterie a grampozitivní bakterie na základě tloušťky jejich buněčných stěn. Kyselé rychlé barvení odlišuje kyselinovzdorné bakterie od nekyselinově rychlých bakterií na základě obsahu kyseliny mykolové v buněčné stěně. To je rozdíl mezi kyselinovým a gramovým barvením.
Stáhněte si PDF verzi Gram Stain vs. Acid rychle
Můžete si stáhnout verzi tohoto článku ve formátu PDF a použít jej pro offline účely podle citace. Stáhněte si zde verzi PDF Rozdíl mezi Gram Stain a Acid Fast.
