Klíčový rozdíl - teplá vs studená trypsinizace
Teplá a studená trypsinizace jsou dvě metody používané při enzymatické dezagregaci buněk při kultivaci zvířecích buněk. Klíčový rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací, jak napovídají názvy, závisí na teplotě, při které je trypsin přidán pro buněčnou desagregaci. Teplý trypsinizace probíhá za vyšších teplotách (36,5 - 37 0 C), zatímco studený trypsinizace probíhá za nízkých teplot.
Během procesu primární buněčné kultivace živočišných buněk se používají tři hlavní metody, které se ukázaly jako úspěšné. Tyto tři metody zahrnují mechanickou disagregaci buněk, enzymatickou dezagregaci buněk a primární techniku explantace. Enzymatická disagregace buněk, která vede k izolaci buněk, se provádí pomocí enzymu trypsinu degradujícího bílkoviny. Proto je tento proces známý jako Trypsinizace. Trypsinizaci lze provést za dvou různých podmínek, a to teplé trypsinizace a studené trypsinizace. Teplá trypsinizace je metoda ošetření buněk trypsinem za teplých podmínek při teplotě 36,5 - 37 0C. Studená trypsinizace je proces ošetření trypsinem, který probíhá za chladnějších podmínek, nejlépe v ledu za udržování velmi nízkých teplot.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to teplá trypsinizace
3. Co je to studená trypsinizace
4. Podobnosti mezi teplou a studenou trypsinizací
5. Porovnání vedle sebe - teplá vs. studená trypsinizace ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je teplá trypsinizace?
Lze provést trypsinizaci k rozložení buněčných složek za účelem izolace buněk k produkci primární buněčné kultury. Trypsin je enzym degradující bílkoviny a enzymovou směsí použitou při trypsinizaci může být buď surový extrakt nebo čištěný produkt. Surový extrakt je považován za účinnější při lýze proteinů a dezintegraci buněk, protože obsahuje další degradační enzymy.
Teplá trypsinizace je nejčastěji používanou enzymatickou metodou buněčné dezagregace, která probíhá za vyšších teplot. Před ošetřením trypsinizací se požadovaná tkáň rozseká na menší kousky. Usnadňuje proces snadné dezagregace. Nasekaná tkáň se poté promyje ve speciálním médiu známém jako médium Dissection Basal Salt.
Po dokončení promývacího kroku se buňky transformují do baňky obsahující aktivní enzym, kterým je trypsin. Jak je tato technika znamená teplé trypsinizací protokol, trypsin je umístěn při teplotě okolo 37 0 ° C po dobu přibližně čtyř hodin.
Obrázek 01: Trypsin
Obsah je smíchán a míchán pomocí metod odstředění pro usnadnění protokolu a pro urychlení procesu desagregace. Jakmile je dosaženo doporučené doby, buňky mohou být získány ze supernatantu. Buňky odvozené od supernatantu se poté inkubují při konkrétní teplotě a čase.
Co je studená trypsinizace?
Studená trypsinizace je další typ trypsinizace, který probíhá za studených podmínek. Při této technice se buňky, které se sekají a promyjí, umístí do lahviček na led a poté se namočí trypsinem. Doba namáčení je mnohem delší - asi 6 - 24 hodin.
Po dokončení postupu namáčení, trypsin se odstraní z buněčného lyzátu a kousky tkáně se dále inkubuje při teplotě 37 0 ° C po dobu asi 20 - 30 minut. Disagregace buněk je způsobena opakovanou pipetováním tkáňové směsi. To umožní buňkám disociovat z membrány a přijít k supernatantu. Jakmile jsou buňky v supernatantu, jsou inkubovány a pěstovány při požadované teplotě a časovém období.
Metoda studené trypsinizace má několik výhod
- Vyšší výtěžek životaschopných buněk, protože poškození buněk je minimalizováno. Poškození buněk je minimalizováno nepoužíváním kroků centrifugace.
- Velmi pohodlná metoda.
- Méně pracné.
Hlavní omezení metody studené trypsinizace spočívá v tom, že v jednom případě nelze použít velká množství.
Jaké jsou podobnosti mezi teplou a studenou trypsinizací?
- Procesy trypsinizace za tepla i za studena používají k desagregaci buněk enzym trypsin.
- Procesy trypsinizace za tepla i za studena se používají v postupech buněčné kultury pro dezagregaci buněk.
- V postupech léčby teplým i studeným trypsinizací jsou buňky odvozeny od supernatantu.
Jaký je rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Teplá vs studená trypsinizace |
|
| Teplá trypsinizace je metoda ošetření buněk trypsinem za teplých podmínek při teplotě 36,5 - 37 0. | Studená trypsinizace je proces ošetření trypsinem, který probíhá za chladnějších podmínek, nejlépe v ledu za udržování velmi nízkých teplot. |
| Protokol | |
| Nasekané kousky tkáně byly udržovány při teplotě 37 0 ° C kontinuálně po celou dobu postupu. | Nasekané kousky tkáně se nejprve udržuje na ledově chladného teplotách a potom udržuje při teplotě 37 ° 0. |
| Teplota | |
| Teplá trypsinizace nastává při 36,5 - 37 0 | Studená trypsinizace nastává při ledově nízkých teplotách. |
| Čas spotřebovaný | |
| Na celý proces (asi 4 hodiny) teplé trypsinizace je zapotřebí méně času. | Pro studenou trypsinizaci je nutná delší doba (přibližně 6 - 24 hodin). |
| Výtěžek životaschopných buněk | |
| Nízká teplá trypsinizace. | Vysoký při studené trypsinizaci. |
| Použití odstředění | |
| Centrifugace je nutná pro disagregaci buněk při teplé trypsinizaci. | U studené trypsinizace není centrifugace nutná. |
| Počáteční množství tkáně pro trypsinizaci | |
| Při teplé trypsinizaci lze použít větší množství tkáně. | Při studené trypsinizaci lze použít menší množství tkáně. |
| Poškození buňky | |
| Vysoká kvůli centrifugaci při teplé trypsinizaci. | Méně kvůli studené trypsinizaci. |
Shrnutí - Teplá vs studená trypsinizace
Trypsinizace je metoda použití enzymu degradujícího bílkoviny trypsin pro disagregaci a přípravu primárních buněčných kultur během procesu buněčné kultivace. Existují dvě hlavní techniky trypsinizace založené na teplotách použitých během procedury. Jsou to teplé a studené trypsinizace. Teplý trypsinizace se provádí při teplotě 37 0 ° C, zatímco studený trypsinizace se provádí za chlazení ledem chladu. Ačkoli dokončení studené trypsinizace trvá déle, říká se, že má vyšší výtěžek životaschopných buněk. To je způsobeno skutečností, že poškození buněk je minimalizováno při studené trypsinizaci, protože nepoužívá intenzivní kroky centrifugace. To je rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací.
