Klíčový rozdíl - YAC vs M13 fágový vektor
Klonování DNA je důležitý proces, který umožňuje množení důležitých fragmentů DNA organismů. Vyžaduje spojení specifické DNA s vektorovou DNA k vytvoření rekombinantní DNA, která se transformuje do hostitelského organismu. Vektor je molekula DNA, která se chová jako prostředek k přenosu cizího genetického materiálu do jiné buňky nebo organismu. Mělo by být schopné replikace uvnitř hostitelského organismu a produkce více kopií rekombinantní DNA. Při klonování DNA se používají různé druhy vektorů. Kvasinkový umělý chromozom (YAC) a fágový vektor M13 jsou dva typy. Klíčovým rozdílem mezi fágovým vektorem YAC a M13 je, že YAC je umělý chromozom, který se replikuje v kvasinkových buňkách, zatímco fágový vektor M13 je jednořetězcová kruhová DNA bakteriofága M13, která se replikuje v buňkách E Coli.
OBSAH
1. Přehled a hlavní rozdíl
2. Co je YAC
3. Co je fágový vektor M13
4. Porovnání vedle sebe - YAC vs M13 fágový vektor
5. Shrnutí
Co je YAC Vector?
YAC je uměle vytvořený chromozom, který má schopnost nést velký segment cizí DNA a replikovat se v kvasinkových buňkách. Má centromeru, telomeru a autonomně se replikující sekvence nezbytné pro replikaci a stabilitu. YAC by také měl nést selektivní marker nebo markery a restrikční místa, aby se stal účinným klonovacím vektorem. Velké sekvence v rozmezí od 1 000 kb do 2 000 kb mohou být vloženy do YAC a přeneseny do kvasinek.
Obrázek 01: Vektor YAC
Co je M13 Phage Vector?
Bacteriophage M13 je virus, který infikuje a replikuje se v E. coli. Genom bakteriofága M13 má malou velikost, přibližně 6,7 kb. Je to jednořetězcová, kruhová a pozitivní smyslová DNA. Tento virus konkrétně infikuje bakterie E Coli prostřednictvím F pilus. Jakmile vstoupí do ssDNA do bakterie, syntetizuje svůj komplementární řetězec a stane se dsDNA nebo replikativní formou (RF) M13. RF se může v hostitelském organismu chovat jako plazmid. DsDNA se replikuje v E Coli a produkuje ssDNA nesoucí nové fágy. Tyto nové fágy jsou kontinuálně uvolňovány z E Coli bez zabíjení hostitelské buňky. Infekce však zpomaluje růst E. coli. dsDNA může být extrahována z bakteriálních buněk a použita jako vektory při klonování DNA. Jsou známé jako fágové vektory M13. Mohou být snadno manipulovány a použity podobně jako plazmidové vektory.
Vrozená schopnost infekce těchto fágů M13 slouží jako dobrá kvalifikace pro použití jako vektor při genovém klonování. Při vývoji M13 na vektor by do jeho genomu mělo být začleněno několik prvků. Jsou to gen pro lac represorový (lac I) protein, operátorově-proximální oblast lac Z genu, lac promotor a mnohočetné klonovací místo (polylinker). Když se jako vektory použije dsDNA z M13, může se s ní zacházet jako s plazmidovým vektorem. Použití ssDNA M13 má však výhody při sekvenování DNA a místně cílené mutagenezi.
Protože fágový vektor M13 nese více klonovacích míst v oblasti lacZ, lze rekombinované vektory snadno identifikovat skríninkem modro-bílé kolonie na agarových destičkách obsahujících IPTG a X-Gal. Modré plaky vyrobené na destičkách neobsahují rekombinované fágy. Proto mohou být pro účely klonování vybrány fágy s vložkami.
Obrázek 02: Bakteriofág M13
Jaký je rozdíl mezi YAC a M13 Phage Vector?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Fágový vektor YAC vs M13 |
|
| YAC je geneticky upravený chromozom, který má schopnost nést velký segment cizí DNA a replikovat se v kvasinkových buňkách. | Fágový vektor M13 je virový vektor vyvinutý bakteriofágem M13, který se používá k vložení cizí DNA do E Coli. |
| Účel | |
| YAC byly navrženy ke klonování velkých fragmentů genomové DNA do kvasinek. | Fágové vektory M13 se používají k vložení cizí DNA do E Coli. |
| Délka vložky | |
| YAC mohou obsahovat genomové inzerty o velikosti megabáze (1 000 kb - 2 000 kb). | Velikost vložek je přibližně 1 500 b / s. |
| Konstrukce | |
| YAC DNA je obtížné intaktní purifikovat a vyžaduje vysokou koncentraci pro generování vektorového systému YAC. | Vyskytuje se cyklickým fotosyntetickým elektronovým řetězcem. |
| Stabilita | |
| YAC je nestabilní. | Fágy M13 lze snadno extrahovat. |
| Velikost | |
| Enzymy jsou větší molekuly. | Fágy M13 jsou stabilní než YAC. |
Shrnutí - Fágový vektor YAC vs M13
YAC je uměle konstruovaný vektorový systém využívající specifickou oblast kvasinkového chromozomu k vložení velkých segmentů genetického materiálu do kvasinkových buněk. Fágový vektor M13 je vektorový systém odvozený z bakteriofága M13, který jako hostitelský organismus používá E. coli. To je hlavní rozdíl mezi YAC a M13 Phage Vector. Oba jsou stejně užitečné v technologii rekombinantní DNA a klonování genů.
