Klíčový rozdíl - Imunofluorescence vs. Imunohistochemie
Diagnostika nemocí, která využívá molekulárně biologické metody, se stala rozvíjející se oblastí technologie klinické laboratoře. Zahrnuje všechny testy a metody k identifikaci nemoci a porozumění příčině nemoci analýzou DNA, RNA nebo exprimovaných proteinů v organismu. Rychlý pokrok v molekulární diagnostice umožnil základní výzkum přenosných a nepřenosných nemocí. Ty se používají ke stanovení změn v sekvenci nebo úrovních exprese v rozhodujících genech nebo proteinech podílejících se na nemoci. Imunofluorescence (IF) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě tak široce používané techniky v biologii rakoviny. IF je typ IHC, kde se k analýze monoklonálních a polyklonálních protilátek používá metoda detekce fluorescence, zatímco IHC používá k detekci monoklonálních a polyklonálních protilátek metody založené na chemii. To je klíčový rozdíl mezi IF a IHC.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to imunofluorescence
3. Co je to imunohistochemie
4. Podobnosti mezi imunofluorescencí a imunohistochemií
5. Porovnání vedle sebe - imunofluorescence vs. imunohistochemie ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je to imunofluorescence (IF)?
Imunofluorescence je detekční technika, při které jsou protilátky použité v testu značeny pomocí fluorescenčních barviv nebo fluorescenčních proteinů pro účely detekce. Značené sekundární protilátky mohou mít za následek nežádoucí signály na pozadí; proto je IF technika založena na značení samotné primární protilátky v současnosti, aby se zabránilo nežádoucím signálům během detekce. Prostřednictvím této techniky je zabráněno nespecifické vazbě mezi primární a sekundární protilátkou a je rychlejší, protože není zahrnut žádný sekundární inkubační krok. Zlepšuje se také kvalita dat.
Obrázek 01: Dvojité imunofluorescenční barvení pro BrdU, NeuN a GFAP
Fluorochromy nebo fluorescenční barviva jsou sloučeniny, které mohou absorbovat záření, přednostně excitované ultrafialové záření. Když částice dosáhnou základního stavu z excitovaného stavu, vyzařují záření, které je zachyceno a detekováno detektorem za vzniku spektra. Je velmi důležité, aby fluorescenční značka byla kompatibilní a stabilní pro konkrétní reakci a měla by být správně konjugována s protilátkou, aby byly získány přesné výsledky. Jedním z nejpoužívanějších fluorochromů je fluorescein isothiokyanát (FITC), který je zelené barvy, s absorpčními a emisními špičkovými vlnovými délkami 490 nm, respektive 520 nm. Rhodamin, další látka používaná při IF, má červenou barvu a má odlišné absorpční a emisní maximální vlnové délky 553 nm a 627 nm.
Co je to imunohistochemie (IHC)?
IHC je metoda molekulárního testování praktikovaná za účelem identifikace a potvrzení přítomnosti antigenu v cílové buňce. Cílovou buňkou může být infekční částice, mikrobiální patogen nebo maligní nádorová buňka. IHC využívá monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů přítomných na buněčném povrchu cílových buněk. Tato technika je založena na vazbě antigen-protilátka. K těmto protilátkám je konjugován detekční marker, aby se detekovala přítomnost nebo nepřítomnost konkrétního antigenu. Těmito markery mohou být chemické markery, jako jsou enzymy, fluorescenčně značené protilátky nebo radioaktivně značené protilátky.
Obrázek 02: Výřez myší mozek obarvený imunohistochemií
Nejpopulárnější aplikací IHC je v biologii rakovinných buněk identifikace přítomnosti maligních nádorů, ale také se používá k detekci infekčních onemocnění.
Jaké jsou podobnosti mezi imunofluorescencí a imunohistochemií?
- Imunofluorescence a imunohistochemie probíhají za podmínek in vitro.
- Obě techniky jsou založeny na antigenu-protilátce
- Oba jsou velmi rychlé techniky.
- Výsledky technik jsou reprodukovatelné.
- Oba mají vylepšenou kvalitu dat.
- Tyto techniky používané v diagnostice rakoviny a infekčních nemocí.
Jaký je rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Imunofluorescence vs Imunohistochemistry |
|
| IF je detekční technika, při které jsou protilátky použité v testu značeny pomocí fluorescenčních barviv nebo fluorescenčních proteinů pro detekci. | IHC je detekční technika, při které jsou protilátky použité v testu značeny pomocí chemikálií nebo radioaktivních prvků pro detekci. |
| Přesnost | |
| Přesnost je vyšší u techniky IF ve srovnání s IHC. | Přesnost je u IHC nižší. |
| Specifičnost | |
| IF je konkrétnější. | IHC je méně konkrétní. |
Shrnutí - Imunofluorescence vs Imunohistochemistry
Molekulární mechanismy přinesly mnoho změn v oblasti medicíny a vedly k pokročilým metodám molekulárního testování, které přinesly revoluce v oblasti diagnostiky. Tyto vynálezy vedly k rychlé a přesné identifikaci a potvrzení choroby, což umožnilo úspěšné podávání a výrobu léčiv. Tyto techniky se také používají ve farmakologii za účelem nalezení cílů léčiv a potvrzení farmakokinetických vlastností léčiva během metabolismu léčiv. IF a IHC jsou dvě diagnostické metody, které jsou založeny na konceptu vazby antigenu a protilátky, i když způsob detekce v obou technikách se liší. IF používá k detekci antigenu princip fluorescence a IHC používá k detekci antigenu koncept chemické konjugace. To je rozdíl mezi IF a IHC.
Stáhněte si PDF verzi imunofluorescence vs. imunohistochemie
Můžete si stáhnout verzi tohoto článku ve formátu PDF a použít jej pro offline účely podle citace. Stáhněte si zde PDF verzi. Rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií.
