Klíčový rozdíl - hybridizace in situ vs. imunohistochemie
Diagnostika rakoviny a infekčních nemocí je oblíbeným trendem, kdy se používají nové techniky založené na proteomice a genomice za účelem identifikace nádorů nebo infekčních buněk, jejich množení a míst vývoje buněk a analýzy genetického základu většiny přenosných a nepřenosných onemocnění. Výsledkem bude přesné zpracování a návrh léků a vývoj přizpůsobených terapií pro nemoci. In situ hybridizace (ISH) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě takové široce používané techniky v biologii rakoviny a klíčový rozdíl mezi hybridizací in situ a imunochemií spočívá v molekulách, které se používají při analytickém postupu. U ISH se při analýze používají sondy nukleových kyselin, zatímco u IHC se pro diagnostické stanovení používají monoklonální a polyklonální protilátky.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je hybridizace in situ
3. Co je imunohistochemie
4. Podobnosti mezi hybridizací in situ a imunohistochemií
5. Porovnání vedle sebe - hybridizace in situ vs. imunohistochemie ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je hybridizace in situ (ISH)?
In situ hybridizace je technika hybridizace nukleových kyselin, která se přímo provádí na části nebo části tkáně, v celé tkáni nebo v buňkách. Tato technika závisí na teorii Watson Crickova komplementárního párování bází, což vede k hybridům DNA-DNA nebo hybridům DNA-RNA, které dokážou detekovat mutované geny nebo identifikovat požadovaný gen, který nás zajímá. Jako hybridizace se během hybridizační techniky používají jednovláknové sekvence DNA, dvouvláknové sekvence DNA, jednovláknové sekvence RNA nebo syntetické oligonukleotidové sekvence a tyto sondy jsou označeny radioaktivním fosforem na svém 5 'konci pro identifikační postupy autoradiografií nebo značeny pomocí fluorescenčních barviv. K dispozici jsou různé typy technik ISH na základě typu použité sondy a použitého typu vizualizační techniky.
Obrázek 01: Fluorescenční hybridizace in situ
Existuje mnoho aplikací ISH, zejména v molekulární diagnostice infekčních onemocnění za účelem identifikace přítomnosti patogenů a potvrzení patogenu pomocí molekulární diagnostiky. Používá se také v oblastech vývojové biologie, karyotypizace a fylogenetické analýzy a fyzického mapování chromozomů.
Co je to imunohistochemie (IHC)?
V technice IHC je hlavní analyzovanou molekulou antigen. Během IHC se používají monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů po infekci nebo stavu maligní buněčné proliferace. Tato technika je založena na vazbě antigen-protilátka a pro tuto techniku se používají enzymové značky; jednou takovou aplikací je ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markery mohou být také fluorescenčně značené protilátky nebo radioaktivně značené protilátky.
Obrázek 02: Imunohistochemie
IHC je široce používán pro detekci rakovinných buněk. Diagnostické postupy se zaměřují na antigeny přítomné v nádorových buňkách, aby identifikovaly a charakterizovaly nádor. Stejný postup je součástí diagnostiky infekčních agens. Monoklonální a polyklonální protilátky se také používají k analýze různých genových produktů umožněním vazebné reakce protilátka-antigen mezi požadovaným proteinem a podanou syntetickou protilátkou.
Jaké jsou podobnosti mezi hybridizací in situ a imunohistochemií?
- ISH a IHC jsou vysoce specifické reakce.
- Obě techniky jsou vysoce přesné.
- Obě techniky lze použít v diagnostice rakoviny a infekčních onemocnění.
- Tyto techniky se provádějí ve sterilních prostředích in-vitro.
- Oba jsou rychlé techniky, které poskytují reprodukovatelné výsledky.
- ISH a IHC používají detekční metody, jako je radioaktivní značení a fluorescenční techniky.
Jaký je rozdíl mezi hybridizací in situ a imunohistochemií?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
In situ hybridizace vs imunohistochemie |
|
| ISH je technika hybridizace nukleových kyselin, která se přímo provádí na části nebo řezu tkáně nebo celé tkáni. | IHC je technika, při které se ke stanovení přítomnosti antigenů, což jsou speciální proteinové markery umístěné na buněčných površích, používají monoklonální a polyklonální protilátky. |
| Typ analyzovaných biomolekul | |
| ISH analyzuje nukleové kyseliny. | IHC analyzuje proteiny-antigeny. |
| Základy biochemické reakce | |
| V této technice dochází ke komplementárnímu párování bází mezi DNA-DNA nebo DNA-RNA. | Interakce antigenu a protilátky se účastní imunohistochemie. |
| Metody detekce spojené s enzymem | |
| Metody detekce spojené s enzymem nelze v ISH použít. | V IHC lze použít detekční metody spojené s enzymy. |
Shrnutí - Hybridizace in situ vs imunohistochemie
Molekulární diagnostika jsou rychlé a potvrzující metody, které lze použít k identifikaci nepřenosného onemocnění, jako je rakovina nebo přenosného onemocnění, jako je HIV nebo tuberkulóza, na základě molekulárních markerů přítomných na buňkách, které vedou k projevu onemocnění. Molekulární markery mohou být přítomny ve formě exprimovaných proteinů nebo na genetické úrovni, na základě které jsou zavedeny různé nové techniky ke zvýšení účinnosti a jsou méně pracné, i když s těmito technikami jsou spojeny vysoké náklady. ISH tedy závisí na tvorbě hybridů DNA-DNA nebo DNA-RNA a IHC závisí na specifických reakcích mezi protilátkou a antigenem. To je rozdíl mezi hybridizací in situ.
Stáhněte si PDF verzi hybridizace in situ vs imunohistochemie
Můžete si stáhnout verzi tohoto článku ve formátu PDF a použít jej pro offline účely podle citace. Stáhněte si zde verzi PDF Rozdíl mezi hybridizací in situ a imunohistochemií.
