Klíčový rozdíl - horizontální vs. vertikální gelová elektroforéza
Gelová elektroforéza je laboratorní technika používaná v genetice k oddělení směsí obsahujících DNA, RNA a další proteiny podle jejich příslušného náboje a velikosti molekul. DNA, RNA nebo proteiny, které je třeba při této metodě oddělit, procházejí gelem, který obsahuje malé póry. Molekuly jsou poháněny gelem elektrickým polem. Molekuly procházejí póry gelu a rychlost pohybu je nepřímo úměrná jejich příslušné délce. Proto se molekuly s nižší velikostí molekul budou pohybovat rychleji než molekuly s vyšší molekulovou hmotností. Elektrické pole je generováno rozdílem náboje na dvou koncích gelu. Jeden konec obsahuje kladný náboj a druhý konec obsahuje záporný náboj. Protože molekuly DNA a RNA jsou negativně nabité,budou přitahovány směrem ke kladně nabitému konci gelu. Gelová elektroforéza může být dvou různých metod: horizontální gelová elektroforéza a vertikální gelová elektroforéza. Při horizontální gelové elektroforéze je gel přítomen v horizontální orientaci a je ponořen do kontinuálního běžícího pufru, který je přítomen uvnitř samotného gelového boxu. Při vertikální gelové elektroforéze je pufrovací systém orientován vertikálně a je diskontinuální se dvěma komorami přítomnými nahoře a dole s katodou, respektive anodou. To je klíčový rozdíl mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou.gel je přítomen v horizontální orientaci a je ponořen do kontinuálního běžícího pufru, který je přítomen uvnitř samotného gelového boxu. Při vertikální gelové elektroforéze je pufrovací systém orientován vertikálně a je diskontinuální se dvěma komorami přítomnými nahoře a dole s katodou, respektive anodou. To je klíčový rozdíl mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou.gel je přítomen v horizontální orientaci a je ponořen do kontinuálního běžícího pufru, který je přítomen uvnitř samotného gelového boxu. Při vertikální gelové elektroforéze je vyrovnávací systém orientován vertikálně a je diskontinuální se dvěma komorami přítomnými nahoře a dole s katodou, respektive anodou. To je klíčový rozdíl mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je horizontální gelová elektroforéza
3. Co je vertikální gelová elektroforéza
4. Podobnosti mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou
5. Porovnání vedle sebe - horizontální vs. vertikální gelová elektroforéza ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je horizontální gelová elektroforéza?
Horizontální gelová elektroforéza využívá základní teorii pro separaci molekul DNA, RNA nebo proteinů podle jejich příslušné velikosti a náboje. V této technice je gel přítomen v horizontální orientaci a je ponořen do pufru, který je kontinuální. Agarózový gel se používá k oddělení gelového boxu do dvou oddílů. Jeden konec gelového boxu obsahuje anodu, zatímco druhý konec obsahuje katodu. Když je aplikován proud, vyrovnávací paměť použitá v této technice umožňuje vytvoření gradientu náboje. Po nanesení náboje má gel tendenci se zahřívat. Vyrovnávací paměť funguje také jako chladicí kapalina, která udržuje teplotu na optimální úrovni. Recirkulace běžícího pufru zabraňuje tvorbě gradientu pH. Při horizontální gelové elektroforéze nelze použít diskontinuální pufrovací systém, protože se oba oddíly gelového systému spojí s běžícím pufrem. Akrylamid se používá během gelové elektroforézy k oddělení proteinových směsí.
Obrázek 01: Horizontální gelová elektroforéza
Při horizontální gelové elektroforéze nelze použít akrylamid, protože gelový box je vystaven kyslíku. V důsledku přítomnosti kyslíku je polymerace akrylamidu inhibována, což narušuje tvorbu gelu. Horizontální gelová elektroforéza je snadná metoda, která se používá při separaci DNA a RNA.
Co je vertikální gelová elektroforéza?
Technika vertikální gelové elektroforézy funguje podle primární teorie gelové elektroforézy, ale je považována za složitější než metoda horizontální gelové elektroforézy. Tato technika využívá diskontinuální vyrovnávací paměť. Katoda je umístěna v horní komoře a anoda je umístěna ve spodní komoře. Elektrody přítomné v každém oddělení poskytují požadované elektrické pole. Mezi dvěma namontovanými skleněnými deskami se nalije tenká vrstva gelu. Proto je horní část gelu ponořena do horní komory a spodní část gelu je ponořena do komory dole. Jakmile je aplikován proud, malá část pufru se přesune do spodní komory z horní komory skrz gel. Proud aplikovaný v této technice je minutových jednotek.
Obrázek 02: Vertikální gelová elektroforéza
Při vertikální gelové elektroforéze pufr teče pouze gelem. To umožňuje přesnou kontrolu gradientu napětí během separační fáze. Lze použít akrylamidový gel, protože komory nejsou vystaveny atmosférickému kyslíku. Vzhledem k menší velikosti pórů akrylamidového gelu lze dosáhnout přesné separace s vyšším rozlišením.
Jaké jsou podobnosti mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou?
- Oba systémy fungují podle základní teorie gelové elektroforézy.
- Anoda a katoda se používají k zajištění požadovaného elektrického pole v obou systémech.
Jaký je rozdíl mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Horizontální vs vertikální gelová elektroforéza |
|
| Horizontální gelová elektroforéza je technika gelové elektroforézy, při které je gel přítomen v horizontální orientaci. | Vertikální gelová elektroforéza je technika gelové elektroforézy, při které je gel orientován svisle. |
| Buffer | |
| Horizontální gelová elektroforéza se skládá z kontinuálního pufru. | Běžící pufr je ve vertikální gelové elektroforéze diskontinuální. |
| Použití akrylamidu | |
| Akrylamid nelze použít pro horizontální gelovou elektroforézu, protože gelový box je vystaven atmosférickému kyslíku. | Vzhledem k tomu, že gel není vystaven atmosférickému kyslíku v důsledku dvou samostatných komor, lze pro vertikální gelovou elektroforézu použít akrylamid. |
| Funkce | |
| Horizontální gelová elektroforéza se častěji používá k separaci směsí DNA a RNA, ale nikoli proteinů. | K oddělení směsí bílkovin se používá vertikální gelová elektroforéza. |
Shrnutí - Horizontální vs Vertikální gelová elektroforéza
Gelová elektroforéza je laboratorní technika, která se široce používá při separaci směsí obsahujících molekuly DNA, RNA a proteinů. Existují dvě metody gelové elektroforézy: horizontální a vertikální gelová elektroforéza. U horizontální gelové elektroforézy je průběžný pufr kontinuální, zatímco u vertikální gelové elektroforézy je diskontinuální. To je rozdíl mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou. Oba systémy fungují podle společného principu gelové elektroforézy.
Stáhnout PDF verzi horizontální vs vertikální gelové elektroforézy
Můžete si stáhnout verzi tohoto článku ve formátu PDF a použít jej pro offline účely podle citace. Stáhněte si zde PDF verzi. Rozdíl mezi horizontální a vertikální gelovou elektroforézou.
