Klíčový rozdíl - stránka SDS vs Western Blot
Western blot je technika, která detekuje konkrétní protein ze vzorku proteinu. Tato technika se provádí pomocí několika klíčových kroků: gelová elektroforéza, blotování a hybridizace. Gelová elektroforéza s dodecylsulfátem sodným na polyakrylamidu (stránka SDS) je druh techniky gelové elektroforézy, která se používá k oddělení proteinů podle jejich velikostí (molekulových hmotností). Western blot je speciální vrstva blotovací membrány, která se používá k přenosu stejného vzoru proteinů na stránce SDS. Klíčovým rozdílem mezi SDS Page a Western blotem je to, že SDS Page umožňuje separaci proteinů ve směsi, zatímco Western blot umožňuje detekci a kvantifikaci specifického proteinu ze směsi. Oba jsou užitečné při studiích proteinové analýzy.
OBSAH
1. Přehled a hlavní rozdíl
2. Co je stránka SDS
3. Co je Western Blot
4. Porovnání vedle sebe - stránka SDS vs Western Blot
5. Shrnutí
Co je stránka SDS?
SDS Page je technika gelové elektroforézy používaná pro separaci proteinů. Běžně se používá v biochemii, genetice, forenzní a molekulární biologii. Jakmile jsou proteiny extrahovány ze vzorku, jsou naneseny na gel vyrobený z SDS a polyakrylamidu. SDS je aniontový detergent, který se používá k linearizaci proteinů (denaturních proteinů) a k přidávání negativního náboje linearizovaným proteinům úměrně jejich molekulové hmotnosti. Polyakrylamid se stává pevnou podporou gelu. Denaturované proteiny, které jsou záporně nabité, migrují přes gel na pozitivní konec aparátu. Podle velikosti proteinů se migrační rychlosti mezi proteiny liší a dochází k separaci. Stránka SDS je proto užitečná pro separaci jednotlivých proteinů na základě jejich velikostí.
Příprava polyakrylamidového gelu pro frakcionaci proteinů je zásadním krokem v SDS. Správná koncentrace polyakrylamidu a typ použitého zesíťovacího činidla silně ovlivňují fyzikální vlastnosti gelu, což vede k skutečné separaci různých proteinů. Velikosti pórů gelu by měly být správně upraveny, aby bylo možné účinně je oddělit. Stránka SDS je však považována za techniku separace proteinů s vysokým rozlišením.
Technika stránky SDS má zásadní omezení v analýze proteinů. Protože SDS denaturuje proteiny před separací, neumožňuje detekci enzymatické aktivity, vazebných interakcí proteinů, proteinových kofaktorů atd.
Obrázek 01: Stránka SDS
Co je Western Blot?
Technika Western blot umožňuje detekci specifického proteinu z proteinové směsi a měření množství a molekulové hmotnosti proteinu. Western blot je membrána použitá během blotovací procedury k získání zrcadlového obrazu proteinových vzorů v SDS-polyakrylamidovém gelu. Membrána, která se používá pro Western blot, je většinou vyrobena z nitrocelulózy nebo polyvinyliden-difluoridu (PVDF). Membrána s přeneseným proteinem může být použita k identifikaci požadovaného proteinu. Vyžaduje vysoce kvalitní protilátku pro detekci požadovaného proteinu hybridizací. Protilátka se váže na svůj specifický antigen a odhaluje přítomnost požadovaného antigenu, kterým je protein.
Přenos proteinů z polyakrylamidového gelu SDS na western blot se provádí elektroblotováním. Jedná se o efektivní a rychlou metodu, která způsobí, že se proteiny elektroforézou dostanou z gelu a přecházejí na nitrocelulózovou membránu (western blot).
Obrázek 02: Western Blot
Jaký je rozdíl mezi SDS Page a Western Blot?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Stránka SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page je technika gelové elektroforézy. | Western blot je technika, která se provádí na membráně k detekci specifického proteinu ze směsi. |
| Použití | |
| Stránka SDS umožňuje separaci proteinů podle jejich velikosti. | Western blot umožňuje přenos proteinů na gelu SDS page beze změny jeho vzoru a umožňuje hybridizaci se specifickými protilátkami. |
| Nevýhody | |
| Nevýhodou této techniky je denaturace bílkovin, vysoká cena a přítomnost neurotoxinových chemikálií. | Tato technika je časově náročná a vyžaduje dobře zkušené osobní a specifické kontrolované podmínky. |
Shrnutí - Stránka SDS vs Western Blot
Stránka SDS a Western blot jsou dvě metody zahrnuté do analýzy proteinů. Stránka SDS umožňuje snadnou separaci proteinů na gelu podle jejich molekulové hmotnosti. Western blot pomáhá potvrdit přítomnost a množství specifického proteinu hybridizací se specifickými protilátkami. To je rozdíl mezi SDS Page a western blot.
