Klíčový rozdíl - přímá vs nepřímá ELISA
Enzymatický imunotest (ELISA), známý také jako enzymový imunotest, je sérologický test, který detekuje protilátky v krvi. Používá se jako diagnostický nástroj ke zjištění, zda byl pacient vystaven určitému typu viru nebo jiného infekčního agens (antigenu) a zda tělo vytvořilo protilátky proti infekci. ELISA může také identifikovat minulé a současné infekce. Proto je ELISA často používána jako předběžný screeningový test lékaři před hloubkovou analýzou nemocí. Tento test lze provést v laboratoři odebráním vzorku krve pacientovi. Existují dva typy testu ELISA: přímý ELISA a nepřímý ELISA. Klíčový rozdíl mezi přímou a nepřímou ELISA spočívá v tom, že nepřímá ELISA je citlivější a vyžaduje přidání sekundární protilátky, zatímco přímá ELISA je méně citlivá a používá pouze primární protilátku.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je přímá ELISA
3. Co je nepřímá ELISA
4. Porovnání vedle sebe - přímá vs. nepřímá ELISA
5. Shrnutí
Co je přímá ELISA?
ELISA je diagnostický test onemocnění prováděný za účelem identifikace přítomnosti konkrétních antigenů nebo protilátek v krvi. Provádí se to jako destičkový test. Využívá protilátky spojené se snadno stanovitelnými enzymy. Přítomnost antigenů ve vzorku séra se váže na specifické protilátky spojené s enzymy. V závěrečném kroku se přidá specifický substrát pro reakci s enzymem. Enzym přeměňuje substrát na barevný produkt nebo produkt produkující signál. Změna barvy chemického substrátu odhaluje přítomnost konkrétní protilátky ve vzorku séra. Přímý test ELISA používá pouze primární protilátku navázanou na enzym. Po navázání na antigen rychle mění barvu, což naznačuje přítomnost infekčního agens v krvi. Nicméně,intenzita signálů je u přímé ELISA slabší, protože epitopy jsou omezeny na vazbu antigenu. Přímá ELISA je tedy ve srovnání s nepřímou ELISA méně citlivá.
Obrázek 01: Přímý test ELISA
Co je nepřímá ELISA?
ELISA může být provedena za použití dvou typů protilátek, jmenovitě; primární protilátka a sekundární protilátka. Nástroj nepřímé ELISA používá oba typy protilátek k zesílení signálů pro lepší detekci. Technika nepřímé ELISA se provádí následujícím způsobem.
- Destičky se inkubují s antigeny a promyjí, aby se blokovala nespecifická vazba.
- Poté se přidají primární protilátky a promyjí se.
- Přidají se sekundární protilátky spojené s enzymem a promyjí se.
- Přidá se substrát a nechá se reagovat s enzymy.
- Jsou detekovány signály a je identifikována přítomnost nebo nepřítomnost specifického antigenu ve vzorku.
V nepřímém testu ELISA se několik sekundárních protilátek může vázat na jednu primární protilátku. Sekundární protilátky jsou spojeny se snadno stanovitelnými enzymy. Jedna vazba proto může vytvořit silný signál v důsledku více než jedné interakce. Nepřímý test ELISA je tedy citlivější než přímý test ELISA. Nepřímý test ELISA však může vytvářet nespecifické signály v důsledku zkřížených reakcí sekundárních protilátek.
Obrázek 02: Nepřímý test ELISA
Jaký je rozdíl mezi přímou a nepřímou ELISA?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Přímá vs nepřímá ELISA |
|
| Přímá ELISA je ve srovnání s nepřímou ELISA méně citlivá. | Nepřímý test ELISA je citlivější. |
| Čas potřebný | |
| Přímý test ELISA je rychlý proces. | Nepřímý test ELISA je časově náročný. |
| Použití protilátek | |
| V přímé ELISA se používá pouze jeden typ protilátek (primární protilátky). | Pro nepřímou ELISA se používají primární a sekundární protilátky. |
| Spojte se s enzymy | |
| Primární protilátky jsou spojeny s enzymy. | Sekundární protilátky jsou spojeny s enzymy. |
| Křížová reaktivita druhých protilátek | |
| Přímá ELISA eliminuje zkříženou reaktivitu druhých protilátek. | Nepřímý ELISA je ovlivněn zkříženou reaktivitou druhých protilátek. |
| Signály | |
| Signály jsou ve srovnání s nepřímým testem ELISA slabé. | Signály jsou amplifikovány v nepřímém testu ELISA. Proto je snadné jej zjistit. |
Shrnutí - přímá vs nepřímá ELISA
ELISA je biochemická technika používaná hlavně v imunologii k detekci přítomnosti protilátky nebo antigenu ve vzorku krve pacienta. Lze jej provést pomocí dvou procesů známých jako přímá nebo nepřímá ELISA. Přímý test ELISA používá k detekci antigenu pouze primární protilátky, zatímco nepřímý test ELISA používá primární i sekundární protilátky. V přímé ELISA jsou značeny primární protilátky, zatímco v nepřímé ELISA jsou značeny sekundární protilátky. To je rozdíl mezi přímým a nepřímým testem ELISA.
