Klíčový rozdíl - Phusion vs Taq polymeráza
DNA polymerázy jsou široce používané enzymy v technikách molekulární biologie a jsou také přirozeně přítomny ve všech organismech, které procházejí replikací DNA. Jsou to klíčové polymerující enzymy, které se účastní replikace. DNA polymeráza je schopna přidávat nukleotidy na volný 3 'konec řetězce DNA, čímž způsobí prodloužení nového řetězce. V současné době je vzhledem k vývoji molekulární biologie v diagnostice nemocí a průmyslových aplikacích důležité vyrábět polymerázy mající různé prospěšné vlastnosti. To zvyšuje přesnost metody a dělá z ní rychlejší techniku. Fúze a Taq polymeráza jsou dva komerčně vyráběné termostabilní polymerázové enzymy, které se používají ve speciálních molekulárních aplikacích. Fúze je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používá se hlavně v klonovacích experimentech ke zvýšení věrnosti. Taq DNA polymeráza je standardní DNA polymeráza používaná při polymerázové řetězové reakci (PCR) a je izolována z termostabilní bakterie; Thermus aquaticus. Klíčovým rozdílem mezi těmito dvěma enzymy je zdrojový mikroorganismus. Fúze se izoluje z extremofilu Pyrococcus furiosus, zatímco polymeráza Taq se izoluje z termofilu Thermus aquaticus. Taq polymeráza se izoluje z termofilu Thermus aquaticus. Taq polymeráza se izoluje z termofilu Thermus aquaticus.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to fúze
3. Co je to Taq polymeráza
4. Podobnosti mezi Phusion a Taq polymerázou
5. Porovnání vedle sebe - Phusion vs. Taq polymeráza ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je to Phusion?
Fúzní DNA polymeráza je nová polymeráza, která se vyrábí izolací enzymu z Pyrococcus furiosus, což je extremofilní Archaea. Tyto mikroby sídlí v extrémně vysokých teplotách, čímž se polymeráza stává vysoce tepelně stabilní polymerázou. Fúzní polymeráza se používá k získání extrémní věrnosti oproti konvenční termostabilní polymeráze; Taq polymeráza. Fúzní polymeráza je schopná amplifikovat dlouhé templáty až do 7,5 kB genomové DNA. Optimální kapacita Polymerace Phusion polymerázy je při teplotě 72 0 C. Phusion je také použit v klonování produkty pro sekvenování, analýzu exprese a analýzy mutací.
Fúzní DNA polymeráza má 3 '- 5' exonukleázovou aktivitu. To umožňuje korekturu nově syntetizovaného řetězce po syntéze. Proto se nukleotidové neshody mohou snadno opravit. Má tedy menší míru chyb. Celkové výhody Phusion polymerase jsou;
- Extrémní věrnost
- Vysoká rychlost a zkrácená doba prodloužení
- Robustní reakce a vyžaduje minimální optimalizaci
- Vysoký výnos
Obrázek 01: Fúze
Hlavní nevýhodou fúzní polymerázy je, že je inhibována v přítomnosti deoxyuridin trifosfátu (dUTP). Pokud se v reakční směsi hromadí dUTP, může to inhibovat působení fúzní polymerázy. Tomu se zabrání zpracováním reakční směsi dUTPázou před přidáním enzymu. V současné době se jako řešení tohoto problému místo fúzní polymerázy používá varianta fúzní polymerázy rezistentní k dUTP známá jako Pfu Turbo.
Co je Taq polymeráza?
Vynález Taq DNA polymerázy způsobil revoluci v oblasti molekulární biologie. Vyřešilo to hlavní problém v amplifikaci DNA. Taq DNA polymeráza je tepelně stabilní polymerázový enzym extrahovaný a izolovaný z termofilní bakterie Thermus aquaticus. Objev těchto enzymů vede k vývoji PCR. Tento enzym umožnil použití polymerázové řetězové reakce při amplifikaci DNA namísto konvenčních pracných klonovacích technik. PCR se nyní používá v molekulární diagnostice, v zemědělských a průmyslových oborech a do techniky se přidává mnoho nových variací.
Obrázek 02: Taq polymeráza
Taq DNA polymeráza funguje při optimálním teplotním rozmezí mezi 72 0 C - 80 0 C. Taq DNA polymeráza vyžaduje kofaktor; hořčík pro svou funkci. Taq polymeráza nemá schopnost korektury 3 '- 5', proto je chybovost Taq DNA polymerázy vysoká ve srovnání s novějšími typy DNA polymeráz, jako je Phusion polymerase atd. Popularita Taq DNA polymerázy však zůstává stejné ve světě vědy díky pohodlí a flexibilitě enzymu.
Jaké jsou podobnosti mezi fúzemi a Taq polymerázou?
- Enzymy Phusion i Taq polymerase jsou polymerizující enzymy, které jsou schopné přidávat nukleotidy na 3 'volný konec řetězce DNA.
- Jak Phusion, tak Taq polymerázy vyžadují pro zahájení polymerace sekvenci primerů.
- Jak Phusion, tak Taq polymerázy jsou tepelně stabilní.
- Jak Phusion, tak Taq polymerázy se používají v PCR mechanismech k amplifikaci DNA.
- Při přidávání polymerázy k reakční směsi se jako poslední přidávají polymerázy Phusion i Taq, aby se zajistila účinnost enzymu.
- Jak Phusion, tak Taq polymerázy jsou komerčně syntetizovány pro experimentální účely molekulární biologie.
- Jak Phusion, tak Taq polymerázy vyžadují kofaktor pro dokončení své funkce.
Jaký je rozdíl mezi fúzemi a Taq polymerázou?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Fúze vs Taq polymeráza |
|
| Fúze je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používá se hlavně v klonovacích experimentech ke zvýšení věrnosti. | Taq DNA polymeráza je standardní DNA polymeráza používaná při polymerázové řetězové reakci (PCR) a je izolována z termostabilní bakterie Thermus aquaticus. |
| Zdrojový organizmus | |
| Fúze se extrahuje z extremofilní archy - Pyrococcus furiosus. | Tato literární díla pokrývají období kolonizace až období dekolonizace. |
| Schopnost korektury čtení | |
| Schopnost čtení 3 '- 5' je přítomna ve Phusion. | Schopnost čtení 3 '- 5' v Taq polymeráze chybí. |
| Věrnost | |
| Vysoká věrnost je tam s Phusion. | Taq polymeráza vykazuje nízkou věrnost. |
| Zesílení | |
| Fúze je schopná amplifikovat dlouhé fragmenty DNA. | Taq polymeráza je schopná amplifikovat mnohem kratší fragmenty DNA. |
| otrava dUTP | |
| Fúzní akce je inhibována akumulačním lichým. | Taq polymeráza není inhibována dUPT. |
Shrnutí - Fúze vs Taq polymeráza
Fúze a Taq DNA polymeráza jsou dvě tepelně stabilní polymerázy, které se používají v technikách PCR. Fúze je polymeráza izolovaná z extremofilu Pyrococcus furiosus, zatímco Taq je izolována z termostabilních bakterií Thermus aquaticus. Objev Taq DNA polymerázy vede k vynálezu PCR. Phusion má oproti Taq mnoho výhod, díky nimž je Phusion lepší volbou při výrobě vysoce věrné DNA. Taq polymeráza se však stále používá jako standardní polymerázový enzym v PCR. To je rozdíl mezi Phusion a Taq polymerázou.
