Rozdíl Mezi Phusion A Taq Polymerázou

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Naposledy změněno: 2023-12-16 08:37

Klíčový rozdíl - Phusion vs Taq polymeráza

DNA polymerázy jsou široce používané enzymy v technikách molekulární biologie a jsou také přirozeně přítomny ve všech organismech, které procházejí replikací DNA. Jsou to klíčové polymerující enzymy, které se účastní replikace. DNA polymeráza je schopna přidávat nukleotidy na volný 3 'konec řetězce DNA, čímž způsobí prodloužení nového řetězce. V současné době je vzhledem k vývoji molekulární biologie v diagnostice nemocí a průmyslových aplikacích důležité vyrábět polymerázy mající různé prospěšné vlastnosti. To zvyšuje přesnost metody a dělá z ní rychlejší techniku. Fúze a Taq polymeráza jsou dva komerčně vyráběné termostabilní polymerázové enzymy, které se používají ve speciálních molekulárních aplikacích. Fúze je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používá se hlavně v klonovacích experimentech ke zvýšení věrnosti. Taq DNA polymeráza je standardní DNA polymeráza používaná při polymerázové řetězové reakci (PCR) a je izolována z termostabilní bakterie; Thermus aquaticus. Klíčovým rozdílem mezi těmito dvěma enzymy je zdrojový mikroorganismus. Fúze se izoluje z extremofilu Pyrococcus furiosus, zatímco polymeráza Taq se izoluje z termofilu Thermus aquaticus. Taq polymeráza se izoluje z termofilu Thermus aquaticus. Taq polymeráza se izoluje z termofilu Thermus aquaticus.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl

2. Co je to fúze

3. Co je to Taq polymeráza

4. Podobnosti mezi Phusion a Taq polymerázou

5. Porovnání vedle sebe - Phusion vs. Taq polymeráza ve formě tabulky

6. Shrnutí

Co je to Phusion?

Fúzní DNA polymeráza je nová polymeráza, která se vyrábí izolací enzymu z Pyrococcus furiosus, což je extremofilní Archaea. Tyto mikroby sídlí v extrémně vysokých teplotách, čímž se polymeráza stává vysoce tepelně stabilní polymerázou. Fúzní polymeráza se používá k získání extrémní věrnosti oproti konvenční termostabilní polymeráze; Taq polymeráza. Fúzní polymeráza je schopná amplifikovat dlouhé templáty až do 7,5 kB genomové DNA. Optimální kapacita Polymerace Phusion polymerázy je při teplotě 72 ⁰ C. Phusion je také použit v klonování produkty pro sekvenování, analýzu exprese a analýzy mutací.

Fúzní DNA polymeráza má 3 '- 5' exonukleázovou aktivitu. To umožňuje korekturu nově syntetizovaného řetězce po syntéze. Proto se nukleotidové neshody mohou snadno opravit. Má tedy menší míru chyb. Celkové výhody Phusion polymerase jsou;

• Extrémní věrnost
• Vysoká rychlost a zkrácená doba prodloužení
• Robustní reakce a vyžaduje minimální optimalizaci
• Vysoký výnos

Obrázek 01: Fúze

Hlavní nevýhodou fúzní polymerázy je, že je inhibována v přítomnosti deoxyuridin trifosfátu (dUTP). Pokud se v reakční směsi hromadí dUTP, může to inhibovat působení fúzní polymerázy. Tomu se zabrání zpracováním reakční směsi dUTPázou před přidáním enzymu. V současné době se jako řešení tohoto problému místo fúzní polymerázy používá varianta fúzní polymerázy rezistentní k dUTP známá jako Pfu Turbo.

Co je Taq polymeráza?

Vynález Taq DNA polymerázy způsobil revoluci v oblasti molekulární biologie. Vyřešilo to hlavní problém v amplifikaci DNA. Taq DNA polymeráza je tepelně stabilní polymerázový enzym extrahovaný a izolovaný z termofilní bakterie Thermus aquaticus. Objev těchto enzymů vede k vývoji PCR. Tento enzym umožnil použití polymerázové řetězové reakce při amplifikaci DNA namísto konvenčních pracných klonovacích technik. PCR se nyní používá v molekulární diagnostice, v zemědělských a průmyslových oborech a do techniky se přidává mnoho nových variací.

Obrázek 02: Taq polymeráza

Taq DNA polymeráza funguje při optimálním teplotním rozmezí mezi 72 ⁰ C - 80 ⁰ C. Taq DNA polymeráza vyžaduje kofaktor; hořčík pro svou funkci. Taq polymeráza nemá schopnost korektury 3 '- 5', proto je chybovost Taq DNA polymerázy vysoká ve srovnání s novějšími typy DNA polymeráz, jako je Phusion polymerase atd. Popularita Taq DNA polymerázy však zůstává stejné ve světě vědy díky pohodlí a flexibilitě enzymu.

Jaké jsou podobnosti mezi fúzemi a Taq polymerázou?

• Enzymy Phusion i Taq polymerase jsou polymerizující enzymy, které jsou schopné přidávat nukleotidy na 3 'volný konec řetězce DNA.
• Jak Phusion, tak Taq polymerázy vyžadují pro zahájení polymerace sekvenci primerů.
• Jak Phusion, tak Taq polymerázy jsou tepelně stabilní.
• Jak Phusion, tak Taq polymerázy se používají v PCR mechanismech k amplifikaci DNA.
• Při přidávání polymerázy k reakční směsi se jako poslední přidávají polymerázy Phusion i Taq, aby se zajistila účinnost enzymu.
• Jak Phusion, tak Taq polymerázy jsou komerčně syntetizovány pro experimentální účely molekulární biologie.
• Jak Phusion, tak Taq polymerázy vyžadují kofaktor pro dokončení své funkce.

Jaký je rozdíl mezi fúzemi a Taq polymerázou?

Rozdílný článek uprostřed před tabulkou

Fúze vs Taq polymeráza
Fúze je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používá se hlavně v klonovacích experimentech ke zvýšení věrnosti.	Taq DNA polymeráza je standardní DNA polymeráza používaná při polymerázové řetězové reakci (PCR) a je izolována z termostabilní bakterie Thermus aquaticus.
Zdrojový organizmus
Fúze se extrahuje z extremofilní archy - Pyrococcus furiosus.	Tato literární díla pokrývají období kolonizace až období dekolonizace.
Schopnost korektury čtení
Schopnost čtení 3 '- 5' je přítomna ve Phusion.	Schopnost čtení 3 '- 5' v Taq polymeráze chybí.
Věrnost
Vysoká věrnost je tam s Phusion.	Taq polymeráza vykazuje nízkou věrnost.
Zesílení
Fúze je schopná amplifikovat dlouhé fragmenty DNA.	Taq polymeráza je schopná amplifikovat mnohem kratší fragmenty DNA.
otrava dUTP
Fúzní akce je inhibována akumulačním lichým.	Taq polymeráza není inhibována dUPT.

Shrnutí - Fúze vs Taq polymeráza

Fúze a Taq DNA polymeráza jsou dvě tepelně stabilní polymerázy, které se používají v technikách PCR. Fúze je polymeráza izolovaná z extremofilu Pyrococcus furiosus, zatímco Taq je izolována z termostabilních bakterií Thermus aquaticus. Objev Taq DNA polymerázy vede k vynálezu PCR. Phusion má oproti Taq mnoho výhod, díky nimž je Phusion lepší volbou při výrobě vysoce věrné DNA. Taq polymeráza se však stále používá jako standardní polymerázový enzym v PCR. To je rozdíl mezi Phusion a Taq polymerázou.