Klíčový rozdíl - stohovací gel vs oddělovací gel
Pro vysvětlení techniky SDS-PAGE se používají termíny stohovací gel a separační gel. SDS-PAGE nebo elektroforéza na gelu dodecylsulfát-polyakrylamid sodný je laboratorní technika, která se používá k oddělení proteinových molekul na základě jejich molekulových hmotností. Teorie za touto technikou spočívá v tom, že proteiny s různými molekulovými hmotnostmi vykazují různé rychlosti migrace; nízkomolekulární molekuly migrují rychleji, zatímco vysokomolekulární molekuly migrují pomalu. Médiem pro migraci je gel. Existují dva typy gelů pojmenovaných jako stohovací gel a separační gel. Klíčovým rozdílem mezi stohovacím gelem a separačním gelem je to, že pH stohovacího gelu je 6,8, zatímco pH separačního gelu je 8,8.
OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je stohovací gel
3. Co je separační gel
4. Vztah mezi stohovacím gelem a separačním gelem
5. Porovnání vedle sebe - stohovací gel vs separační gel ve formě tabulky
6. Shrnutí
Co je stohovací gel?
Stohovací gel je nízko koncentrovaný polyakrylamidový gel, který se umístí na vrch koncentrovanějšího rozlišovacího gelu (separační gel) technikou SDS-PAGE. Stohovací gel se používá ke zlepšení rozlišení elektroforézy. Rozlišení se zvyšuje kvůli rozdílu mezi koncentracemi stohovacího gelu a rozlišovacího gelu, které ovlivňují proteiny ve vzorku. Protože koncentrace polyakrylamidu ve stohovacím gelu je nízká, velikost pórů je vyšší. To také pomáhá zvýšit separaci.
Stohovací gel je sypký polyakrylamidový gel s velkými póry asi 7% polyakrylamidu. Tyto póry nepůsobí jako významná bariéra pro velké molekuly proteinů. Proto tento gel mírně ovlivňuje mobilitu těchto proteinů. To umožňuje separaci podle pohyblivosti a velikosti proteinu jejich koncentrací mezi dvěma gely.
Obrázek 01: Akrylamidový gel SDS-PAGE
PH stohovacího gelu je 6,8. Jeho pH je kyselé než pH štěpícího gelu o 2 jednotky pH. Toto pH znamená nižší iontovou sílu, tedy vyšší elektrický odpor. To vyvolává mobilitu proteinů než jiné nabité částice přítomné v gelu.
Co je separační gel?
Separační gel nebo rozlišovací gel technologie SDS-PAGE je vysoce koncentrovaný polyakrylamidový gel, který je umístěn na vrchu nízko koncentrovaného stohovacího gelu. Separační gel obsahuje vysoké množství polyakrylamidu (10%). PH tohoto gelu se udržuje na hodnotě pH = 8,8, což je vyšší úroveň pH než u stohovacího gelu.
Obrázek 02: Zařízení pro gelovou elektroforézu
Když molekuly proteinu dosáhnou separačního gelu, migrace těchto molekul se zpomalí, protože separační gel je gel s vysokou koncentrací s malou velikostí pórů, který může působit jako značná bariéra pro pohyb molekul proteinu. Toto zpomalení umožňuje ostatním proteinům migrovat pomalu, což vede k úzkému koncentrovanému pásu mezi dvěma gely.
Jaký je vztah mezi stohovacím gelem a separačním gelem?
Ve stejném přístroji se používají oba typy stohovacího gelu a oddělovacího gelu
Jaký je rozdíl mezi stohovacím gelem a separačním gelem?
Rozdílný článek uprostřed před tabulkou
Stohovací gel vs oddělovací gel |
|
| Stohovací gel je nízko koncentrovaný polyakrylamidový gel, který se umístí na vrch koncentrovanějšího rozlišovacího gelu (separační gel) technikou SDS-PAGE. | Separační gel nebo rozlišovací gel technikou SDS-PAGE je vysoce koncentrovaný polyakrylamidový gel, který je umístěn na vrchu nízko koncentrovaného stohovacího gelu. |
| Umístění | |
| Stohovací gel se umístí na rozlišovací (separační) gel. | Oddělovací gel se umístí na dno nádoby používané pro gelovou elektroforézu. |
| Koncentrace | |
| Koncentrace stohovacího gelu je vysoká. | Koncentrace separačního gelu je nízká. |
| Obsah polyakrylamidu | |
| Stohovací gel obsahuje asi 7% polyakrylamidu. | Separační gel obsahuje asi 10% polyakrylamidu. |
| pH | |
| PH stohovacího gelu je 6,8. | PH separačního gelu je 8,8. |
| Velikost pórů | |
| Ve stohovacím gelu jsou přítomny velké velikosti pórů. | V separačním gelu jsou přítomny malé velikosti pórů. |
| Řešení | |
| Stohovací gel poskytuje lepší rozlišení. | Oddělovací gel poskytuje špatné rozlišení. |
Shrnutí - Stohovací gel vs oddělovací gel
Stohovací gel a separační gel jsou dva typy polyakrylamidových gelů, které se používají k lepší separaci molekul proteinu v daném vzorku. Rozdíl mezi stohovacím gelem a separačním gelem spočívá v tom, že pH stohovacího gelu je 6,8, zatímco pH separačního gelu je 8,8.
